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糖尿病自身免疫抗体检测-胰岛素抗体

简要描述:

糖尿病自身免疫抗体检测-胰岛素抗体用于定量检测人类血清中胰岛素抗体。胰岛β细胞自身抗体是I 型糖尿病(type 1 DM)重要的血清标志物,该抗体可以识别抗原包括胰岛素,谷氨酸脱羧酶(GAD65)和胰岛细胞抗原IA-2、ICA-512以及锌转运体8。

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RSR 公司生产的胰岛素自身抗体(Insulin Ab) RIA 检测试剂盒仅用于定量检测人类血清中胰岛素抗体。需专业技术人员操作。

一、糖尿病自身免疫抗体检测-胰岛素抗体背景
胰岛β细胞自身抗体是I 型糖尿病(type 1 DM)重要的血清标志物,该抗体可以识别抗原包括胰岛素,谷氨酸脱羧酶(GAD65)和胰岛细胞抗原IA-2、ICA-512以及锌转运体8。

二、糖尿病自身免疫抗体检测-胰岛素抗体检测原理

在RSR 的胰岛素自身抗体RIA 检测方法中,受测血清在*步孵育中先与[^125I]-(A14)单碘胰岛素结合,而后在第二步中与加入的抗人IgG 结合,使已形成的碘标记的胰岛素-抗胰岛素抗体复合物产生沉淀。经离心后经测定碘125 的放射量可测得沉淀中胰岛素抗体的浓度。本试剂盒测定范围为0.4 至50u/mL(RSR单位)。

三、实验步骤:
所有试剂除缓冲液外使用前需室温放置(20-25℃)至少30 分钟;所有试剂使用前请混匀。在步骤2,4,5 中建议使用非一次性的Eppendorf 移液器。
1.各自向做好标记的测定管中加入20μL 患者血清、阴性质控品、标准品和阳性
质控品。实验推荐进行双管。
2.每支管中加入25μL 碘125 标记的胰岛素。准备两只额外的空管,向其中加入
标记胰岛素用以测定总计数。
3.使用涡旋搅拌器混匀每支测定管。室温下隔夜孵育(16-20 小时)。
4.每支管中加入100μL 抗人IgG。(总计数测定管除外)使用涡旋搅拌器混匀,盖
好测定管,在2-8℃下孵育1 小时。
5.每支管仲加入2mL 冷藏温度(2-8℃)的缓冲液(总计数测定管除外)。使用涡旋搅
拌器混匀,在4℃下使用冷冻离心机1500g 离心20 分钟。
6.离心完成后弃去上清液。请留意操作,不要损失沉淀物。
7.重复步骤5 和步骤6.
8.使用gamma 计数器测量每支管(含总计数测定管),测量一分钟。

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