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水通道蛋白4 抗体检测试剂盒(酶联免疫法)标准操作流程
发布时间:2018-08-30   点击次数:273次

RSR AQP4Ab 抗体检测试剂盒是世界上在该项目上同时获得CE和美国FDA认证的产品,FDA 510(K)注册编号:K161951; 中国CFDA注册受理号:JSZ1800016

1.检测前准备工作:

(1)请确保试剂盒在使用前已在室温环境下(20-25)回温。

(2)核准本次检测涉及样品数,规划好板面布局。

(3)使用剪刀或其他物品打开试剂盒内微孔板的铝箔包装,取出微孔板,将本次检测不涉

及的多余板条卸除,妥善放回铝箔包中。铝箔包内应放置随装的干燥剂并以胶带封好开口,装回自封袋中随试剂盒冷藏保存。

(4)对空白孔做好标记。

(5)取出试剂盒内的浓缩洗液(concentrated wash solution),以纯水十倍稀释浓缩液。总量根

据样品数决定,手工洗板一般用量为500mL/半板。

(6)准备一块ELISA 微孔板盖或若干ELISA 板封口膜。

(7)观察样品性状。新鲜血清或冻存血清应在室温下保持澄清,如发现浑浊或溶血请在

13000RPM 下离心5 分钟,并在接下来的检测中只使用澄清部分。

2.检测流程

(1)取出试剂盒内的AQP4-生物素(AQP4-biotin)和复溶缓冲液(reconstitution buffer),每瓶冻

干粉使用移液器加入1.5ml 复溶缓冲液复溶。复溶瓶数根据本次检测样品量决定,每瓶生

物素可供50-55 孔使用,单次未使用完的已溶解生物素可在2-8℃中存放3 天。

(2)使用移液器向每孔中分别加入标准品(Calibrator),对照品(Negative control&Positive

control)以及患者血清50uL。加样顺序中建议标准品按照先阴性质控品、后标准品由低到

高顺序加样。

(3)除空白孔外使用移液器向每孔中加入25ul 复溶的AQP4-生物素

(4)完成加样后盖好微孔板盖,将微孔板放置于酶标板水平摇床上,按500 /分钟频率振

荡总计两小时。

(5)取出试剂盒内的链霉亲和素过氧化物酶(SA-POD)和专用稀释液(diluent for SA-POD),按

照每0.1mlSA-POD 需加1.9ml 稀释液进行二十倍稀释。一般情况下完成整板检测需用

0.6mlSA-POD 11.4ml 稀释液。推荐使用单独容器盛放稀释后的SA-POD,非特殊情况不

推荐在SA-POD 瓶内直接稀释。

(6)完成孵育后将微孔板取下,打开板盖,采取快速翻转的方式将孔内液体拍净。使用洗

/多道移液器/洗板机抽取稀释完成的洗液进行洗板,每孔洗涤三次。完成后将微孔板倒

扣在吸水纸上拍打以除去多余洗液。若采用自动洗板机则可设定抽取量1mL,加液量

300uL,振荡3-5 秒,洗涤次数为3.

(7)除空白孔外每孔中加入稀释好的SA-POD 100ul。盖好板盖室温使用水平摇床500 /

振荡20 分钟。

(8)重复步骤6.如采用手工洗板,完成三次洗液洗板后追加一次纯水洗板,用以除去泡沫。

(9)请注意:此步骤中包含空白孔。

使用移液器向每孔中加入100ul 显色底物(TMB,棕色瓶),在避光处放置20 分钟,请勿

振荡。

(10)此步骤中包含空白孔。使用移液器向每孔中加入100ul 终止液(stop solution),可观察

到显蓝色的微孔变为亮黄。

(11)盖好板盖,使用水平摇床或手工振荡微孔5 秒,保证微孔内显色过程充分停止。

3.读数及数据处理

(1)读数仪器的调整

检测读数需使用具有读取特定波长的吸光度功能的仪器。推荐使用全波长酶标仪或具备

450nm 405nm 滤光片的酶标仪;本实验推荐在检测步骤9 时打开仪器预热,以取得稳

定的波长利于读数。

(2)读取吸光度

打开计算机,在控制软件中打开已准备好的读板方案,在板面布局中按照本次检测样品数

目更改样品布局。完成设定后点击”Read”开始读板。

(3)完成读数后将结果按读板方案中的报告单模板输出至LIS 系统,打印报告单。

4.检测后工作

(1)读数完毕的微孔板应小心拆下已使用的板条,请勿将孔内液体溅出。将已使用的板条

按医疗废物处理。

(2)空板架使用无水酒精或其他方式妥善清洁后保存,推荐放回试剂盒微孔板的自封袋内。

(3)本次检测未使用干净的复溶生物素及稀释的SA-POD 可留作下次检测使用,随试剂盒其

他成分一并冷藏(2-8)贮存。

(4)洗液及浓缩洗液推荐冷藏贮存。

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